La grande tavola rettangolare di pioppo è divisa in tre scomparti da altrettante arcate scolpite nel legno dipinto e dorato, sorta di cornice appoggiata sopra la figurazione. Vi compare la "Madonna con il Bambino tra San Bernardo da Chiaravalle e San Defendente". Al centro Maria è seduta su un trono simulato da elementi naturali, ha i capelli sciolti ed è avvolta in un manto scuro che in parte cela l'abito rosso che ricade a terra in abbondanti pieghe; sulle ginocchia tiene Gesù con lo sguardo rivolto allo spettatore, lei invece abbassa gli occhi verso la mela simbolica che stringe nella mano destra. I due santi fiancheggiano la tenera immagine centrale, l'uno sulla sinistra in saio candido con libro e pastorale, l'altro sulla destra abbigliato da soldato all'antica con spada vessillo e palma del martirio. Il pittore Ludovico De Donati, che si firma accanto alla data 1513 al termine di una lunga scritta alla base del dipinto, è attento alla rappresentazione dei personaggi quanto alla resa del paesaggio solitario, fatto di morbide colline verdi dominate dal cielo azzurro che sfuma in lontananza, tra sbuffi di nuvole. Graziosa e realistica è la piantina fiorita alla destra di Maria, una aquilegia viola prefigurazione della Passione di Cristo e del dolore di sua madre.